江苏教育学院编

   

    第一篇  基因工程和蛋白质工程

 

　　第一章 　基因工程的分子生物学基础

 

　　１．1遗传信息传递的方向——中心法则
　　　　　识记并理解　遗传信息传递的三角形中心法则

　　１．2ＤＮＡ的复制
　　　　　理解　ＤＮＡ复制的基本模式
　　　　　识记　ＤＮＡ复制的特点及相关的概念

　　１．3ＤＮＡ聚合酶
　　　　　识记　原核细胞和真核细胞的ＤＮＡ聚合酶的种类

　　１．4原核和真核生物基因结构的特征
　　　　　识记并理解　原核和真核生物基因结构的主要特征

　　１．5ＲＮＡ的转录和ＲＮＡ的加工
　　　　　理解　ＲＮＡ合成的基本特征
　　　　　识记　原核和真核生物的ＲＮＡ聚合酶的组成
　　　　　识记并理解　与转录有关的ＤＮＡ序列
　　　　　应用　ＲＮＡ的转录过程及转录后的加工

　　１．6逆转录和逆转录酶
　　　　　识记：转录、逆转录的概念

　　１．7翻译——蛋白质的生物合成
　　　　　识记　翻译的概念
　　　　　理解　蛋白质生物合成的过程及蛋白质翻译后的修饰、加工、折叠和剪接

　　１．8基因表达的调控
　　　　　理解并应用　原核基因表达的调控（主要为大肠杆菌的色氨酸操纵子和乳糖操纵子）及真核基因表达的调控

 

　　第二章　 基因工程的四大要素及实施要点

 

　　２．   1基因工程操作中常用的工具酶

　　２．1．1限制性内切酶与甲基化酶（识记并理解）
　　２．1．2连接酶（识记并理解）
　　２．1．3用于基因工程中的修饰酶（识记并理解 种类）

　　２．   2基因的分离（识记并理解　基因分离的八种方法）

　　２．2．1基因分离的物理化学方法（理解）
　　２．2．2鸟枪法（不作要求）
　　２．2．3cＤＮＡ文库的建立和基因的分离
　　　　　　理解　cＤＮＡ文库与基因文库的区别
　　　　　　识记　组建一个cＤＮＡ文库的基本步骤
　　２．2．4直接从特定的mＲＮＡ分离基因（识记）
　　２．2．5基因组文库的建立和基因的分离（理解并应用）
　　２．2．6从蛋白质入手分离编码此蛋白的基因（理解）
　　２．2．7基因的化学合成（理解并应用）
　　２．2．8利用ＰＣＲ或ＲＴ－ＰＣＲ分离基因（与第五章５．８内容相结合）

　　２．   3基因工程载体

　　２．3．1质粒载体（识记并理解）
　　２．3．2入噬菌载体（理解）
　　２．3．3粘质粒载体（理解）
　　２．3．4Ｍ１３噬菌体及噬菌粒（理解并应用）
　　２．3．5真核细胞用载体（识记）
　　２．3．6人工染色体：YACs、BACs、PACs、MACs、（识记）

　　２．   4受体细胞和重组基因的导入（理解）

　　２．   5基因重组的方法（理解并应用）

　　２．   6基因重组体的筛选（理解并应用）

 

　　第三章 　与基因工程相关的一些理论和技术问题
　
　　３．   1外源基因在宿主细胞中的高效表达

　　３．1．1有效的转录起始与基因高效表达（识记并应用）
　　３．1．2mＲＮＡ的有效延伸和转录终止与基因高效表达（识记并应用）
　　３．1．3mＲＮＡ的稳定性与基因的高效表达（识记并应用）
　　３．1．4有效的翻译起始与基因高效表达（识记并应用）
　　３．1．5遗传密码应用偏倚性与基因高效表达（识记并应用）
　　３．1．6mＲＮＡ的二级结构与基因的高效表达（识记并应用）
　　３．1．7ＲＮＡ的加工与基因的高效表达（识记并应用）
　　３．1．8mＲＮＡ序列上终止密码的选择（识记并应用）
　　３．1．9表达质粒（或载体）的拷贝数及稳定性与基因的高效表达（识记并应用）
　　３．1．10外源蛋白的稳定性与基因高效表达（识记并应用）

　　３．   2基因的融合和融合蛋白的表达

　　３．2．1利用基因融合技术表达外源基因的原由（识记并理解）
　　３．2．2基因融合的策略（应用）
　　３．2．3融合蛋白的亲和纯化（应用）
　　３．2．4融合蛋白的位点特异性切割（应用）

    3．   3外源蛋白的分泌表达

　　３．3．1外源基因在Ｅ．coli中的分泌表达（理解并应用）
　　３．3．2外源基因在枯草杆菌中的分泌表达（识记）
　　３．3．3α－因子前导序列介导的酵母细胞分泌系统（理解并应用）

　　３．   4关于重组蛋白的正确折叠及修饰

　　３．4．1蛋白质折叠和可溶性表达（理解并应用）
　　３．4．2重组蛋白的重折叠（识记并理解）
　　３．4．3外源蛋白在翻译后的修饰（识记并理解）

　　３．   5几种产生基因突变的方法

　　３．5．1寡核苷酸介导的基因突变的概述（识记并理解）
　　３．5．2双引物突变法（识记）
　　３．5．3Ｋunkel突变法（识记并理解）
　　３．5．4利用多聚酶链反应产生突变体（与第五章的５．８内容相结合）
　　３．5．5盒式突变法（识记）

　　３．   6ＤＮＡ序列分析

　　３．6．1Ｓanger双胶氧终止法（识记并理解）
　　３．6．2Ｍaxam-GilbertDNA化学降解法（识记并理解）
　　３．6．3关于变聚丙烯酰胺测序凝胶（识记）

　　３．   7基因的修饰及其对表达的影响

　　３．7．1引言（识记）　　
　　３．7．2ＤＮＡ甲基化作用及基本特性（理解）
　　３．7．3ＤＮＡ甲基化作用的生物功能（理解）
　　３．7．4研究ＤＮＡ甲基化作用的手段（理解并应用）

 

　　第四章　 蛋白质工程概述（理解）

 

    第五章  基因工程和蛋白质工程的进展

 

　　５．1COS细胞瞬时表达系统及其应用（理解并应用）

　　５．2哺乳动物细胞稳定表达系统（理解并应用）

　　５．3核型多角体病毒为载体的昆虫表达系统（理解并应用）

　　５．4噬菌体显示技术（识记并理解）

　　５．5粒子轰击和基因转移（理解）

　　５．6同源重组与基因寻靶（识记并理解）

　　５．7关于转基因动物（识记）

　　５．8聚合酶链式反应及其应用进展（理解ＰＣＲ的基本原理）

　　５．8．1影响ＰＣＲ产物质量的因素（识记并理解）
　　５．8．2ＰＣＲ相关技术（识记）
　　５．8．3ＰＣＲ技术的应用

　　５．9几种有开发前景的研究

　　５．9．1转录因子的研究与治疗药物的开发（识记）
　　５．9．2真核细胞受体的克隆和异源表达是作为药物开发的新工具（识记）
　　５．9．3反议核酸（识记）
　　５．9．4关于ＤＮＡ疫苗（识记并理解）

 

　　第二篇 　酶工程
　　
　　第一章　 酶工程概述

 

　　1．1定义及特点（识记）

　　1．2范围（识记）

 

　　第二章 　酶的来源及酶反应的特点

 

　　２．   1酶的来源及微生物作为酶源的优越性

　　２．1．1酶的主要应用领域（识记并理解）
　　２．1．2微生物作为酶源的优越性（识记并理解）

　　２．   2酶的分类及基本作用原理

　　２．2．1酶的分类（识记）
　　２．2．2酶作用原理（识记并理解）
　　２．2．3酶的反应特点及动力学（理解并应用）

 

　　第三章　 酶的分离纯化及纯度鉴定技术
　
　　３．   1酶的提取

　　３．3．1组织及细胞的破碎（识记 破碎方法）
　　３．3．2酶的抽提（识记 抽提方法）

　　３．   2用于生化物质分离的沉淀技术（理解 各种技术方法及其基本原理、影响因素）

　　３．   3各种分离纯化技术的基本理论依据（理解）

　　３．   4凝胶过滤（理解并应用 凝胶过滤的基本原理、凝胶的物化性质、凝胶的种类、有关概念、凝胶过滤的基本操作）

　　３．   5吸附层析（理解并应用 其基本原理及基本操作）

　　３．   6离子交换层析（理解并应用 其基本原理、层析条件的选择及基本操作）

　　３．   7高效液相色谱（识记HPLC仪器的基本组成 理解HPLC的载体、固定相及如何对物质进定性和定量分析）

　　３．   8亲和层析（理解并应用 基本原理、基本操作）

　　３．   9聚丙烯酰胺凝胶电泳（识记 聚丙烯酰胺凝胶的优点理解并应用 其基本原理及操作）

　　３．10等电聚焦（IEF）（理解 其基本原理 应用 基本操作）

　　３．11几种其它的聚丙烯酰胺凝胶电泳（识记）

　　３．12印迹转移电泳（理解 基本原理 识记 技术特点）

　　３．13各种分离纯化技术的顺序及衔接（识记并理解）

 

　　第四章　 固定化技术

　　４．   1固定化技术的发展史（识记）

　　４．   2固定化技术（识记）

　　４．2．1方法（理解并应用）
　　４．2．2载体（识记并理解）

　　４．   3固定化技术的新进展（识记）

　　４．   4生物传感器为酶工程开拓了新的发展领域（识记）

 

　　第五章　 多酶反应器
　　
　　５．   1意义（应用）
　　５．   2多酶反应器的设计目标和要求（识记）
　　５．   3使用多酶反应器时的一些注意事项（识记）

 

　　第六章　 化学修饰及蛋白质工程等新技术为酶的开发和改造提供是新途径

 

　　６．   1酶的化学修饰（识记）
　　６．   2基因工程技术为酶的生产提供新途径（识记）
　　６．   3蛋白质工程技术为酶的定向改造提供新手段（识记）

 

　　第七章　 酶工程发展的现状和展望（应用）

 

　　第三篇　 细胞工程

 

　　第一章　 抗体产生的机理

 

　　１．1抗体的概念（识记）

　　１．2抗体形成的理论（理解　抗体形成的选择学说）

　　１．3免疫球蛋白的分子结构（识记并理解　四肽链结构及功能区）

　　１．4免疫球蛋白的分子片段（识记）

　　１．5免疫球蛋白的基因结构（理解）

　　１．6抗体多样性的基因基础（理解）

　　１．7抗体多样性的细胞学基础（理解）

　　１．8抗体制备技术的发展（识记）

　　１．8．1双功能抗体（识记并理解）
　　１．8．2抗独特型抗体（识记并理解）
　　１．8．3人一鼠嵌合抗体（识记）
　　１．8．4重构型抗体（识记）
　　１．8．5小分子抗体（识记）
　　１．8．6表位定向选择技术在鼠抗体的人源化中的应用（识记）
　　１．8．7抗体库技术（识记）
　　１．8．8噬菌体抗体库技术（识记并理解）
　　
　　第二章　 细胞工程抗体
　　　　
　　２．   1小鼠体系（识记）

　　２．   2融合前的准备工作

　　２．2．1组织培养材料的准备（识记 组培所需的材料）
　　２．2．2抗原免疫（识记并理解 抗原的概念 应用 免疫前的动物选择）

　　２．   3细胞融合（理解并应用）

　　２．   4融合后的管理（理解并就应用 融合后的筛选、克隆概念及相关技术、单克隆抗体制备的技术、细胞的冷冻和解冻）

 

　　第三章　 人单克隆抗体的制备

　　３．   1制备人单抗的技术路线（识记 人源化抗体制备的技术路线）

　　３．1．1EB病毒转化技术（识记EBV的生物学特性、EBV转化实验的安全问题 理解并应用EBV的制备、B细胞的EBV的转化、EBV转化B细胞的克隆）
　　３．1．2B细胞杂交瘤技术制备人单抗（应用）

　　３．   2人源抗体制备中的难点及新技术方法（识记一些新方法）

 

  　第四章　 单克隆抗体在肿瘤治疗中的应用

 

　　４．1单克隆抗体在体外的应用（识记并理解）
　　４．2单克隆抗体在体内的应用（识记并理解）

 

　　附录：杂交瘤单克隆抗体技术（应用）

 

　　第四篇 　发酵工程及其进展

 

　　第一章 　概述

 

　　１．1历史的回顾（识记）
　　１．2生物技术的发展使发酵工业进入了新时代（识记）

 

  　第二章　 优良菌种的选育

 

　　２．1菌种分离、筛选的原则与步骤（理解并应用）
　　２．2产生特殊物质的微生物筛选（识记并理解）
　　２．3自然选育（识记）
　　２．4诱变育种（识记并理解）

 

　　第三章　 代谢调控和代谢工程
　　
　　３．1代谢调控（理解并应用）
　　３．2代谢工程（理解并应用）

 

　　第四章 　发酵与产物分离偶联

 

　　４．1发酵与产物分离偶联的基础（识记并理解）
　　４．2偶联技术的应用（理解并应用）

 

　　第五章　 发酵过程的优化与控制

 

　　５．1发酵过程的测量（应用）
　　５．2发酵过程模型化（应用）
　　５．3发酵过程控制（应用）

 

　　选用教材:

　　现代生物技术概论，北京师范大学出版社，何忠效等编著。